鱼塘边狂游、乱窜？细菌性败血症？二氧化氯你会用吗？如何控制制剂浓度与活化时间，杀菌才最有效？▏陈昌福专栏

文 | 华中农业大学 陈昌福；武汉科研时代生物技术有限公司 周鑫军 王晓娟 陆珍珠

草鱼患细菌性败血症的症状，主要特征是身体发黑、部分鳞片松动、脱落，鳍条基部有出血现象，部分病鱼的肛门红肿，鳃上有大量黏液并且附有污泥，出现狂游、乱窜等现象。解剖病鱼检查，可见腹腔内有腹水，肠道内少有食物，肠道发红、肠道内有充气的现象。

对于养殖草鱼（Ctenopharyngodon idella）的细菌性败血症（bacterial septicemia），抗生素类“国标渔药”的治疗效果越来越差。在我国不同的水产养殖区均属于能引起严重经济损失的鱼类病害。二氧化氯作为这款水产常用消毒剂，对杀菌有很好的效果。那么如何控制制剂浓度与活化时间，杀菌才最有效？

二氧化氯制剂的浓度与活化时间对杀菌效果的影响 ▏二氧化氯试验④

摘要：本试验通过检测对嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）的杀菌效果，评价了二氧化氯（ClO₂）制剂配制浓度与活化时间对杀菌效果的影响。本实验结果证明，四川齐力绿源水处理科技有限公司生产的ClO₂制剂，将配制浓度控制在8000.0mg/L、活化时间10min的条件下，制备的ClO₂制剂溶液，对A hydrophila显示出了最强的杀菌效果。

关键词：二氧化氯制剂；活化方法；致病菌；杀菌效果

为了验证四川齐力绿源水处理科技有限公司制备的二氧化氯（ClO₂）制剂的活化浓度与时间对杀菌效果的影响，特进行本试验。

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材料与方法

1.1供试药物

四川齐力绿源水处理科技有限公司生产的ClO₂制剂（批准文号：川卫消证字2019第0001号、生产日期20220416）作为本试验中的供试药物。

1.2供试菌株及其培养

从患细菌性败血症的草鱼（Ctenopharyngodon idella）体内，分离到的致病性嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）菌株作本试验的供试菌株。将冷冻保存菌株接种在脑心浸液琼脂培养基（BHIA，Difco）上，28℃培养24 h，以灭菌生理盐水洗下菌苔，离心集菌，并用灭菌生理盐水将浓度调节为1×10⁷cfu/mL，低温保存备用。

1.3ClO₂制剂的配制方法

在配制ClO₂制剂溶液前打开包装袋，从同一个包装袋中准确称取ClO₂制剂若干，分别溶解于3个盛有100.0mL蒸馏水的玻璃烧杯中，轻轻搅动使ClO₂制剂充分溶解，制备成终浓度为2000.0mg/L、4000.0mg/L和8000.0mg/L的3个不同浓度的ClO₂制剂供试原液。

自ClO₂制剂加入蒸馏水中开始计时，于活化10min、20min和30min后，分别从不同浓度的ClO₂制剂供试原液中，定量取样做杀菌试验。

1.4 杀菌处理

从位于武汉市新洲区汪集镇的孟斌鱼苗孵化场蓄水池取水（图1）。将取回的池水在每个容量为250.0mL的三角玻璃烧杯中，分别盛装100.0mL的灭菌池塘水（图2）。

图1示从水产养殖场蓄水池中养殖池水的情景

图2示将养殖池塘水定量分装在三角玻璃烧杯中的情景

经过高压灭菌后（图3），将其移出高压灭菌锅并置于超净工作台上（图4），在无菌条件下，向每个三角玻璃烧瓶中添加1.0 mL菌浓度约为1×10⁷cfu/mL的A.hydrophila活菌液（图5），轻轻摇动三角玻璃烧瓶，使菌液在三角玻璃烧杯瓶中分布均匀。

图3示将养殖池水经过高压灭菌的情景

图4示将灭菌后的三角玻璃烧瓶中置于超净工作台中的情景

分别从不同浓度的ClO₂制剂原液中定时、定量取样，添加在盛有100.0mL灭菌池塘水的三角玻璃烧瓶中，使水体中的ClO₂制剂的终浓度分别达到0.10mg/L，0.30mg/L，0.60mg/L和0.90mg/L。轻摇动添加ClO2制剂原液后的三角玻璃烧瓶，使菌体和药液均匀地分布在水中。另外设置添加菌液但不添加ClO₂制剂原液的三角烧瓶作为对照组。添加药液结束40 min后，检测不同浓度ClO₂制剂的杀菌效果。

图5示向盛有灭菌池水的三角玻璃烧杯中定量添加致病菌的情景

1.5 杀菌效果的检测

在无菌条件下，从各三角玻璃烧瓶中取0.10mL水，塗抹在用BHIA制备的平板上，在28℃条件下培养48 h后，通过计数各平皿中的菌落数量，根据菌落的生成状况，判断ClO₂制剂的杀菌菌效果。

02

结果

采用不同的浓度与活化时间制备的ClO₂制剂溶液，对A.hydrophila杀菌效果的影响见图6。由图6所示结果可以看出，在配制ClO₂制剂溶液时，浓度与活化时间均对配制ClO₂制剂溶液的杀菌效果有影响的。在本试验中，在ClO₂制剂溶液起始浓度为8000.0mg/L以内，配制浓度越大，杀菌效果越好。而将ClO₂制剂添加在水体中后的活化时间，在这次试验中控制的3个活化时间，以将活化时间控制在10min的ClO₂制剂溶液杀菌效果最好。

图6 配制ClO₂制剂的浓度与活化时间对杀菌效果的影响

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讨论

众所周知，ClO₂是一种黄绿色到橙黄色的气体，是国际上公认为安全、无毒的绿色消毒剂。ClO₂常态为气态，沸点11℃。当浓度很高时呈红黄色，低浓度时呈黄绿色，是一种具有强烈刺激性臭味的气体，有类似氯气和硝酸的特殊刺激臭味。在-59℃时凝固成橙红色晶体。

ClO₂能与许多化学物质发生爆炸性反应。尤其是对热、震动、撞击和摩擦相当敏感，极易分解发生爆炸。受热和受光照或遇有机物等能促进氧化作用的物质时，能促进分解并易引起爆炸。气相浓度超过10%则会发生爆炸，若用空气、二氧化碳、氮气等惰性气体稀释时，爆炸性则会有所降低。正是因为ClO2具有这些特点，自人类发现ClO₂后的较长时间内，并没有将其作为商品开发应用。而之所以没有作为商品开发应用，主要是因为ClO₂不能作为直接运输的商品，迄今为止，也只能将其制备成ClO₂制剂的商品形式，需要应用时将其在现场发生后再使用。

现在我国水产养殖用投入品市场上，用作水产用消毒剂的ClO₂制剂有很多，由于制售ClO₂制剂的企业，可能是采用不同的配方制备的ClO₂制剂，因此，在我们利用从水产养殖用投入品市场上，随机采购的多种ClO₂制剂完成的杀菌试验结果证明，市售各种ClO₂制剂对水产动物致病菌的杀菌效果是存在巨大差异的。而本试验结果证明了，即使是同一种ClO₂制剂，配制时的浓度以及活化时间不同，配制而成的ClO₂制剂溶液杀菌效果也是存在明显差异的。本试验结果对ClO₂制剂制售企业给予的提示，ClO₂制剂制售企业在向市场推出ClO₂制剂之前，有必要完成ClO₂制剂配制浓度、活化时间与杀菌效果相关性试验，并且根据效果试验结果，在其产品说明书中详细地写出该产品的使用方法。